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    目录号
    尺寸
    BIO-21098
    250 Units
    BIO-21099
    500 Units

    说明

    具有 3' - 5' 校正核酸外切酶活性的 DNA 聚合酶,即使在快速 PCR 条件下也能提供优异的保真度和出色的 PCR 产量。

    产品特色

    • 准确 – 具有 3’ – 5’ 校正核酸外切酶活性,出错率为 4.4 x 10-7,可实现卓越的 PCR 保真度
    • 高效 –  高度进行性的酶和先进的缓冲液体系,即使使用最具挑战性的模板也能提高 PCR 产量
    • 快速 – 对于 ≤5 kb 扩增子的延伸速率为 1 5s/kb,在快速热循环条件下实现高产量
    • 稳健 – 该酶的高度进展特性赋予对杂质更高的耐受性和扩增复杂模板的能力
    • 灵活 – 非常适合从人类、动物和植物 DNA 高保真地扩增至多 10 kb 的目标

    产品说明

    VELOCITY DNA Polymerase 推荐用于高保真 PCR 扩增。该酶具有 3’ – 5’ 校正核酸外切酶活性,提供 4.4 x 10-7 的出色出错率,可实现从非常广泛的人类、动物和植物靶标进行高度准确的扩增。此外,VELOCITY 是一种高度进行性的酶,对于长达 5 kb 和 10 kb 的靶标,延伸速率分别可达 15 s/kb 和 30 s/kb,从而缩短 PCR 周期。

    VELOCITY 即使在较低的模板浓度下也能提供出色的保真度和极高的 PCR 产量。VELOCITY 的高持续合成性使得快速 PCR 的延伸时间缩短、产物产量增加,并且能够扩增更长的片段。即使在 PCR 条件极具挑战性的分析中,包括存在杂质或富含 GC 的靶标,VELOCITY 也能提供稳健可靠的产率。VELOCITY 是一种高性能的 DNA 聚合酶,非常适合进行高产量、快速 PCR 扩增,甚至对于不含突变的长靶标也适用。

    应用

    • 高保真 PCR
    • 定点诱变
    • 功能基因的克隆
    • 平端克隆
    • 快速 PCR
    • 高产量 PCR
    • 扩增挑战性模板
    • 长片段 PCR
    Main
    即使使用复杂的模板也能实现高保真度和高产量。

    我将 VELOCITY 与 Phusion 进行了并行比较。在纯化和使用微量分光光度计测定浓度后,我用 VELOCITY 得到的产物量几乎是 Phusion 的两倍。

    旧金山加利福尼亚大学的 Jennifer Page

    产品选择

    请参阅实时 PCR 选择图 PCR 选择图以确认为您的 PCR 应用推荐的产品。


    资源

     

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

    250 单位

    500 单位

    VELOCITY DNA Polymerase

    125 µL

    250 µL

    5x Hi-Fi Buffer(包含 10 mM Mg2+

    2 x 1.5 mL

    4 x 1.5 mL

    50 mM MgCl2 溶液

    1 x 1.2 mL

    1 x 1.2 mL

    DMSO

    1 x 1.25 mL

    1 x 1.25 mL

    浓度

    2 u/µL

    储存和稳定性

    所有组件应在收到后储存在 -20°C 下以保持最佳稳定性。应避免重复冻/融循环。

    在推荐条件下储存并正确处理时,试剂的全部活性将保持至外盒标签上指定的有效期。

    运输条件

    以干冰或蓝冰运输。



    常见问题解答

    如果可能的话,我们建议对受影响的样品进行额外的纯化,例如,客户对用 SureClean Plus 纯化含有腐殖酸的样品有非常丰富的经验。或者降低模板浓度,最大程度减少抑制剂的量,可增加聚合酶和引物的量,但不应超过建议的限值。

    VELOCITY 经验证可用于长模板,已成功扩增长达 30 kb 的片段。



    关于聚合酶浓度,我们建议 50µL 反应中 VELOCITY 的使用量为 0.25-2.0 单位,并以最低浓度开始。50 µL 的反应中不要超过 2 u (1µL)。此外,我们强烈建议使用 3% 的 DMSO,以获得最佳的聚合酶性能。对于困难的模板(基因组 DNA、高 GC 含量、复杂的结构组织),更高浓度的 DMSO 可能是有利的。我们建议调整 DMSO 的浓度至 10%,但是在这种情况下,应该降低退火温度,因为 DMSO 可使引物的熔点降低达 5°C。



    我们没有 Velocity 的现成混合物或缓冲液。不过您可以预先将 VELOCITY 缓冲液配制成 2 倍或者 3 倍缓冲液,加入除引物和酶(4 度下不能与其他试剂长期保存)之外的所有试剂。在反应之前只需要添加酶、模板和引物。



    Bioline 自豪地向您提供高质量的聚合酶以满足您的要求。为了帮助选择最适合您特定应用的酶,请参阅我们的酶选择工具

    我们所有的聚合酶保证自购买之日起 12 个月内保持稳定。在这段时间内,酶应保存在 -20°C 下,以保持最佳的活性。

    请注意:我们不建议在 -80°C 下储存聚合酶,因为活性位点上可能形成冰晶,从而影响或破坏酶的活性。

    PCR 是一项具有挑战性的技术,需要对各种参数进行优化以获得最佳结果。如果遇到问题,通过处理一些问题即可轻松解决。请参阅 PCR 故障排除指南,以获取建议并获得具体问题的帮助。

    观察 推荐的解决方案
    无或低 PCR 产量  酶浓度太低 – 以 0.5 U 的增量增加酶的量。
     引物降解 – 检查引物的质量和期限。
     镁浓度太低 – 以 0.25 mM 的增量从起始浓度 1.75 mM 开始增加浓度。
     引物浓度未优化。调整引物浓度 (0.3-1 µM);确保两种引物具有相同的浓度。
     模板浓度太低 – 增加模板的浓度。
     进行阳性对照以确保酶、dNTP 和缓冲液不被降解和/或污染。
    多个条带  引物退火温度太低。提高退火温度。引物退火温度应该比计算的引物 Tm 至少低 5°C。
     在冰上制备预混液或使用热活化聚合酶。
     对于特异性低的问题。尝试加入 3% 的 DMSO(未提供)以提高特异性。
    污点或伪影  模板浓度太高。制备连续稀释模板。
     循环次数太多。将循环减少 3-5 次,以去除非特异性条带。
     酶浓度太高 - 以 0.5 U 的增量减少酶的量。
     延伸时间太长。以 0.5-1 分钟的增量缩短延伸时间。


    这些术语是指在进行 PCR 时要考虑的参数,是根据您的需要选择正确的酶的重要特征。因此理解其含义至关重要:产量:PCR 反应中产生的 DNA 量。保真度:将正确的 dNTP 并入延伸的 DNA 链中的酶的准确性。持续合成能力:聚合酶与模板相关的时间长度,以及因此可以扩增的片段大小。特异性:衡量反应中产生的不需要的副产物的度量。

    在自然界中,DNA 聚合酶纠正延伸中的 DNA 链中核苷酸的错误并入的能力对于宿主生物体的存活是至关重要的。这种能力被称为“校正活性”,发生在 3' 到 5' 的方向。该活性还能使聚合酶去除 3' 末端突出的未配对核苷酸(A 突出端),产生平末端。

    在 72°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmol dNTP 转变成酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

    MyTaq HS DNA 聚合酶可以很好地处理富含 GC 或重亚硫酸盐转化的 DNA 等困难样品。热启动尤其重要,因为它减少了引物二聚体和非特异性扩增。我们建议按照推荐的方案开始。如果需要优化,我们建议优化退火温度。由于亚硫酸盐转化后的 DNA 降解,增加模板和聚合酶的量可能有用。

    单击此处请求样本。您将在两个工作日内收到一封包含送货详情的确认电子邮件。



    评价

    "“我将 VELOCITY 与 Phusion 进行了并行比较。在纯化和使用微量分光光度计测定浓度后,我用 VELOCITY 得到的产物量几乎是 Phusion ..."

    "“与市场上的其他 DNA 聚合酶相比,Bioline 以最合理的价格提供最好的质量。从传统的高保真酶转而使用 Bioline 的 VELOCITY 酶解决了我在 ..."