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    目录号
    尺寸
    BIO-25052
    500 x 50µl Reactions

    说明

    适用于所有长片段 PCR 应用,包括测序以及染色体易位断裂点和其他结构变异作图。

    产品特色

    • 高效 – 专门开发用于可靠地扩增长度为 10- 25 kb 的片段
    • 特异 – 包含抗体介导的热启动酶混合物,在 PCR 设置期间保持完全无活性,以防止非特异性扩增
    • 快速 – 快速酶活化和高效扩增缩短了获得结果所需的时间
    • 灵活 – 适合从复杂靶标(包括人基因组 DNA)扩增广泛的长片段
    • 准确 – 拥有的 3’ – 5’ 校正核酸外切酶活性,可提高保真度,从而能够克隆长片段 PCR 产物

    产品说明

    RANGER DNA Polymerase 推荐用于所有长 PCR 应用,RANGER 是一种易用的高性能酶混合物,专门用于扩增长度达 25 kb 的片段。RANGER 含有高性能 DNA 聚合酶和新型缓冲液体系的独特组合,可提供所需的更高效率以可靠地扩增更长的扩增子。

    RANGER 是一种抗体介导的热启动酶混合物,可消除反应设置过程中的非特异性扩增。未活化的酶不具有聚合酶活性,因此从一开始就避免了通常阻碍长片段 PCR 反应的非特异性扩增(如引物二聚体形成)。

    RANGER Mix 包含专门配制的含有最佳浓度 dNTP、MgCl2 和增强剂的缓冲系统,旨在最大限度地减少 PCR 优化的需求,从而缩短获得结果的时间并消除不必要的重复成本。此外,RANGER 可显著减少设置反应所需的时间,从而可降低污染风险。通过减少可能导致移液误差的移液步骤来确保较高的重现性。

    应用

    • 长片段 PCR
    • TA 克隆
    • 高保真度的 PCR 扩增
    Main
    在长片段 PCR 中的高产量和特异性。

    PCR 酶指南

    下载 PCR 酶指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    PCR 选择图

    根据您的仪器和样本要求选择最适合于您研究的试剂

    在使用 PFU 和其他聚合酶收效甚微之后,我非常高兴能够使用 RANGER DNA 聚合酶,它可以同时用于 8.5 kb 和 6.5 kb 片段的扩增。

    英国班戈大学 NWCR 研究所

    产品选择

    请参阅实时 PCR 选择图 PCR 选择图以确认为您的 PCR 应用推荐的产品。


    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

    500 次反应

    RANGER Mix, 2x

    10 x 1.25 mL

    体积

    • BIO-25052:500 x 50 µL 次反应:10 x 1.25 mL

    浓度

    • 2x

    储存和稳定性

    所有组件应在收到后储存在 -20°C 下以保持最佳稳定性。应避免重复冻/融循环。在推荐条件下储存并正确处理时,试剂的全部活性将保持至外盒标签上指定的有效期。

    虽然建议将组件在 -20°C 下储存,但也可根据需要在 +4°C 下储存。在 +4°C 下储存时,试剂将自收到之日起保持稳定 2 周。

    运输条件

    以干冰或蓝冰运输



    常见问题解答

    Bioline 的混合物的氯化镁浓度见下表。随每种混合物提供一管额外的 50 mM MgCl2 溶液,需要时可用于进一步优化。



     Bioline Mix 最终镁浓度
    ACCUZYME Mix  2.0 mM.
    BioMix/BioMix Red  2.5 mM.
    ImmoMix/ImmoMix Red  3.0 mM.
    BIO-X-ACT Short Mix  2.0 mM.
    MangoMix  2.5 mM.
    MyTaq  3.0 mM.
    RANGER  1.5 mM.



    Bioline 自豪地向您提供高质量的聚合酶以满足您的要求。为了帮助选择最适合您特定应用的酶,请参阅我们的酶选择工具

    我们所有的聚合酶保证自购买之日起 12 个月内保持稳定。在这段时间内,酶应保存在 -20°C 下,以保持最佳的活性。

    请注意:我们不建议在 -80°C 下储存聚合酶,因为活性位点上可能形成冰晶,从而影响或破坏酶的活性。

    PCR 是一项具有挑战性的技术,需要对各种参数进行优化以获得最佳结果。如果遇到问题,通过处理一些问题即可轻松解决。请参阅 PCR 故障排除指南,以获取建议并获得具体问题的帮助。

    观察 推荐的解决方案
    无或低 PCR 产量  酶浓度太低 – 以 0.5 U 的增量增加酶的量。
     引物降解 – 检查引物的质量和期限。
     镁浓度太低 – 以 0.25 mM 的增量从起始浓度 1.75 mM 开始增加浓度。
     引物浓度未优化。调整引物浓度 (0.3-1 µM);确保两种引物具有相同的浓度。
     模板浓度太低 – 增加模板的浓度。
     进行阳性对照以确保酶、dNTP 和缓冲液不被降解和/或污染。
    多个条带  引物退火温度太低。提高退火温度。引物退火温度应该比计算的引物 Tm 至少低 5°C。
     在冰上制备预混液或使用热活化聚合酶。
     对于特异性低的问题。尝试加入 3% 的 DMSO(未提供)以提高特异性。
    污点或伪影  模板浓度太高。制备连续稀释模板。
     循环次数太多。将循环减少 3-5 次,以去除非特异性条带。
     酶浓度太高 - 以 0.5 U 的增量减少酶的量。
     延伸时间太长。以 0.5-1 分钟的增量缩短延伸时间。


    这些术语是指在进行 PCR 时要考虑的参数,是根据您的需要选择正确的酶的重要特征。因此理解其含义至关重要:产量:PCR 反应中产生的 DNA 量。保真度:将正确的 dNTP 并入延伸的 DNA 链中的酶的准确性。持续合成能力:聚合酶与模板相关的时间长度,以及因此可以扩增的片段大小。特异性:衡量反应中产生的不需要的副产物的度量。

    室温下的 PCR 设置过程中,标准聚合酶会有一些活性。使用热启动聚合酶时,该酶在室温下无活性,因此降低了由于这些误引发的寡核苷酸而引起的反应中非特异性产物的风险。此特点使得这类聚合酶非常适用于反应会在室温下长时间放置的高通量应用。

    在自然界中,DNA 聚合酶纠正延伸中的 DNA 链中核苷酸的错误并入的能力对于宿主生物体的存活是至关重要的。这种能力被称为“校正活性”,发生在 3' 到 5' 的方向。该活性还能使聚合酶去除 3' 末端突出的未配对核苷酸(A 突出端),产生平末端。

    在 72°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmol dNTP 转变成酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

    所有的 Bioline 聚合酶都有方便的 2 倍预混液形式可供使用,其中含有进行成功 PCR 所需的所有试剂和添加剂,但模板、引物和水除外。该配方不仅提供了方便和无障碍的 PCR 设置,而且还通过减少所需的移液步骤显著减少了人为错误、不准确性和污染的可能性。

    我们推荐的最终反应体积为 50 μL,需要使用 25 μL 的 2 倍预混液,并使用模板、引物和 PCR 级别的水补足 50 μL。

    虽然混合物的确切组成是专有信息,不过所有混合物均由反应缓冲液、镁、dNTP、聚合酶和添加剂组成,旨在保持聚合酶在混合物中稳定,并为 PCR 提供最佳条件。

    所有 Bioline PCR 混合物均以 2 倍浓度提供,只需要用户添加模板、引物和 PCR 级别的水,直至达到 1 倍最终浓度。

    如果可能的话,我们建议对受影响的样品进行额外的纯化,例如,客户对用 SureClean Plus 纯化含有腐殖酸的样品有非常丰富的经验。或者,降低模板浓度将有助于最大程度减少抑制剂。可增加引物量,但不要超过建议的限值。

    单击此处请求样本。您将在两个工作日内收到一封包含送货详情的确认电子邮件。



    评价

    "“RANGER Mix 在我的 ES 细胞集落筛选的长片段应用工作中发挥了关键作用,我对此印象非常深刻,我会马上改用该产品。” ..."

    "“RANGER Mix 对长 PCR 产物效果很好。我尝试扩增的两个片段都是 ~10kb,两者的产量都很高。” ..."