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    目录号
    尺寸
    MDX027-10
    2000 Reactions

    说明

    qPCR Extraction Control 不仅使用户能够进行诊断性 qPCR 检测以确定 PCR 分析中是否存在抑制剂,还能验证提取步骤是否成功,从而降低在样品 DNA 中得到假阴性结果的可能。

    产品特色

    • 简便 – 方案精简,直接验证 DNA 提取和确定是否存在 qPCR 检测抑制
    • 灵敏 – 即使对 DNA 提取的微小影响以及对扩增的微弱抑制也能通过对照分析识别
    • 优化 – 对照 DNA 具有与任何生物均没有已知同源性的序列,从而避免检测样品 DNA
    • 特异 – 基于探针的检测专门用于实时 PCR 检测
    • 灵活 – 适用于广泛的样品类型,包括富含抑制剂的样品,如血液、尿液和唾液样品

    产品说明

    qPCR 中的一种常见做法是在 DNA 提取后加入已知量的加标对照 DNA,这可以监测 PCR 抑制,但作为提取对照没有价值。理想的做法是在 qPCR 之前使测试样品和内部对照接受相同的处理。Bioline 开发了 qPCR Extraction Control,与加标对照相比,它可以更接近地模仿检测样品。来自检测样品和 DEC 的基因材料通过常规提取方法同时提取,提取对照对于抑制和提取失败与检测样品同样灵敏。

    DEC 细胞具有已知浓度,含有内部对照 DNA 序列。该序列与任何生物都不具有已知的同源性,并且重要的是对样品 DNA 检测的干扰最小。在提取 DNA 之前,将 DEC 细胞作为标准品加入到具有目标样品的裂解缓冲液中。然后在扩增之前将对照混合液(包含引物和探针)加入到反应混合物中。来自内部对照 DNA 的信号可证实提取步骤成功。DEC 还可监测 PCR 抑制剂的共纯化,以免导致有偏差或错误的扩增模式。

    应用

    • 病原体检测
    • 癌症风险评估
    • 基因表达分析
    • 拷贝数变异 (CNV) 分析
    • 基因分型
    • 病毒载量
    Main
    内标掺入对照和基于探针的检测方法可简便地验证 DNA 提取和确定 qPCR。

    应用指南

    qPCR Extraction Control Orange

    仪器兼容性

    qPCR Extraction Control Orange 适合与市售二氧化硅膜 DNA 提取试剂盒和 CHELEX 矩阵配合使用,并已在广泛的 qPCR 平台上进行测试,这些平台包括 ABI-7500、LightCycler 480®、RotorGene-Q™、Mic 和 MX3005P®

    qPCR Extraction Control Orange 可使用 Cal Fluor® Orange 560 ,也适用于 Quasar® 670 或 Cal Fluor® Red 610 以适合现有方案。CAL Fluor 和 Quasar 染料是性能经优化的荧光团,用于进行多重 qPCR。



    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

    500 次反应

    2000 次反应

    Internal Control DNA*

    5 x 500 µL

    20 x 500 µL

    25x Control Mix(包含 Cal Fluor® Orange 560 标记的探针)

    5 x 100 µL

    20 x 100 µL

     * 内部对照 DNA 位于 α-Select 大肠杆菌细胞(基因型:F- deoR endA1 recA1 relA1 gyrA96 hsdR17(rk-, mk+) supE44 thi-1 phoA Δ(lacZYA-argF)U169Ф80lacZΔ15λ–pBR322 (ranseqb1 AmpR))。

    储存和稳定性

    所有组件都应在收到后储存在 -20°C 下。在推荐条件下储存并正确处理时,全部活性将保持至外盒标签上的有效期。

    运输条件

    以干冰/蓝冰运输。



    常见问题解答

    我们建议使用基于探针的检测方法来定量 DNA 和 RNA 提取对照品。此外,REC 试剂盒的设计目的是用于一步法 RT-qPCR。但是,可使用其他 PCR 应用来检测和定量提取对照品。也可使用两步法 PCR、基于 SYBR® 的 PCR 甚至终点 PCR。如果您想使用带有单独逆转录的 REC,则还需要使用提供的引物对照混合物进行逆转录反应。如果您使用的是基于 SYBR® 的检测方法,则只能在单重反应中使用。否则,Ct 值将受到靶标和提取对照品扩增的影响。

    我们推荐使用一步法 RT-qPCR 设置来检测 RNA 提取对照品,不过也可以使用单独的逆转录来执行两步法 qPCR。如果也使用所提供的引物对照混合物进行逆转录,就有必要执行两步法,因为使用六聚体或寡 dT 不能得到一致的结果。客户需要优化用于逆转录的引物对照混合物的量。

    DNA 和 RNA 提取对照品适用于任何类型的提取方法。它可以与基于苯酚、柱或磁珠等的提取方法结合使用,也适用于自动提取。使用任何常用提取方法同时提取来自检测样品和 DEC 或 REC 的遗传物质。

    人造 DEC 或 REC 细胞在提取过程评估中的好处是可以验证样品提取过程。来自内部对照的信号证实提取步骤的成功,并监测可能导致有偏差或错误扩增模式的 PCR 抑制剂的共纯化。内部对照或加标样品不监控整个提取过程,特别是裂解步骤。对于内部基因的定量,也不能区分是提取效率低还是样品已降解。