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    BIO-25049
    100 x 50µl Reactions
    BIO-25050
    500 x 50µl Reactions

    说明

    高效 MyTaq HS DNA Polymerase 与专有校正酶的独特混合,可提高靶标亲和力,适用于具有挑战性的模板和富含抑制剂的样品。

    产品特色

    • 稳健 – 酶混合物和缓冲液体系即使在有抑制剂的情况下,也能实现最具挑战性和复杂靶标的可靠扩增
    • 灵敏 – 更强的靶标亲和力和高持续合成能力可确保在低拷贝数检测中实现成功扩增
    • 高效 – 从人和动植物模板 DNA 中高产量扩增最长 10 kb 的各种靶标
    • 特异 – MyFi DNA Polymerase 是抗体介导的热启动混合酶,在 PCR 设置期间保持完全无活性,以防止非特异性扩增
    • 方便 – 全合一单管预混液提高了 PCR 设置的速度、方便性和准确性
    • 准确 – 校正组件的保真度比 Taq DNA Polymerase 高 3.5 倍,可以克隆 PCR 产物

    产品说明

    MyFi™ 经过专门开发,即使在有 PCR 抑制剂的情况下,也可以从具有挑战性和复杂的靶标中可靠地扩增最长 10 kb 的靶标。因此,MyFi 是扩增 cDNA 文库、复杂的基因组片段和富含 GC 靶标的理想选择。此外,MyFi 对 PCR 抑制剂具有更高的耐受性,从而在 DNA 难以纯化的样品中实现可靠检测。此外,其独特的缓冲体系和酶混合物可以高度灵敏地扩增极低拷贝数的靶标。MyFi 的校正能力允许克隆所有的 PCR 产物。包含的 MyTaq HS 意味着 MyFi 可产生具有 3'-A 突出端的 PCR 产物,该产物非常适合 TA 克隆。MyFi 便于在室温条件下建立反应体系,从而避免非特异扩增和引物二聚体形成。

    MyFi Mix 以预混液的形式提供,只需添加模板、引物和水即可,从而减少了 PCR 设置过程中的移液步骤数,可实现快速、高通量和高重现性检测。其包含的最佳浓度的 dNTP、MgCl2 和增强剂有助于消除优化需求,从而节省了进行不必要的重复检测的时间、精力和成本。

    应用

    • 扩增挑战性和复杂模板
    • 耐抑制剂 PCR
    • 稳健型 PCR
    • TA 克隆
    Main
    来自富含 GC 和复杂模板的高产量 PCR。

    PCR 酶指南

    下载 PCR 酶指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    PCR 选择图

    根据您的仪器和样本要求选择最适合于您研究的试剂

    MyFi Mix 比我们目前的 Taq 更为灵敏且易于使用/设置。不错的产品。

    英国亚伯大学 IBERS

    产品选择

    请参阅实时 PCR 选择图 PCR 选择图以确认为您的 PCR 应用推荐的产品。


    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

    100 次反应

    500 次反应

    MyFi Mix, 2x

    2 x 1.25 mL

    10 x 1.25 mL

    体积

    • BIO-25049:100 x 50 µL 次反应:2 x 1.25 mL
    • BIO-25050:500 x 50 µL 次反应:10 x 1.25 mL

    浓度

    • 2x

    储存和稳定性

    所有组件应在收到后储存在 -20°C 下以保持最佳稳定性。应避免重复冻/融循环。

    在推荐条件下储存并正确处理时,全部活性将保持至外盒标签上指示的有效期。

    运输条件

    以干冰或蓝冰运输。



    常见问题解答

    Bioline 自豪地向您提供高质量的聚合酶以满足您的要求。为了帮助选择最适合您特定应用的酶,请参阅我们的酶选择工具

    我们所有的聚合酶保证自购买之日起 12 个月内保持稳定。在这段时间内,酶应保存在 -20°C 下,以保持最佳的活性。

    请注意:我们不建议在 -80°C 下储存聚合酶,因为活性位点上可能形成冰晶,从而影响或破坏酶的活性。

    PCR 是一项具有挑战性的技术,需要对各种参数进行优化以获得最佳结果。如果遇到问题,通过处理一些问题即可轻松解决。请参阅 PCR 故障排除指南,以获取建议并获得具体问题的帮助。

    观察 推荐的解决方案
    无或低 PCR 产量  酶浓度太低 – 以 0.5 U 的增量增加酶的量。
     引物降解 – 检查引物的质量和期限。
     镁浓度太低 – 以 0.25 mM 的增量从起始浓度 1.75 mM 开始增加浓度。
     引物浓度未优化。调整引物浓度 (0.3-1 µM);确保两种引物具有相同的浓度。
     模板浓度太低 – 增加模板的浓度。
     进行阳性对照以确保酶、dNTP 和缓冲液不被降解和/或污染。
    多个条带  引物退火温度太低。提高退火温度。引物退火温度应该比计算的引物 Tm 至少低 5°C。
     在冰上制备预混液或使用热活化聚合酶。
     对于特异性低的问题。尝试加入 3% 的 DMSO(未提供)以提高特异性。
    污点或伪影  模板浓度太高。制备连续稀释模板。
     循环次数太多。将循环减少 3-5 次,以去除非特异性条带。
     酶浓度太高 - 以 0.5 U 的增量减少酶的量。
     延伸时间太长。以 0.5-1 分钟的增量缩短延伸时间。


    这些术语是指在进行 PCR 时要考虑的参数,是根据您的需要选择正确的酶的重要特征。因此理解其含义至关重要:产量:PCR 反应中产生的 DNA 量。保真度:将正确的 dNTP 并入延伸的 DNA 链中的酶的准确性。持续合成能力:聚合酶与模板相关的时间长度,以及因此可以扩增的片段大小。特异性:衡量反应中产生的不需要的副产物的度量。

    室温下的 PCR 设置过程中,标准聚合酶会有一些活性。使用热启动聚合酶时,该酶在室温下无活性,因此降低了由于这些误引发的寡核苷酸而引起的反应中非特异性产物的风险。此特点使得这类聚合酶非常适用于反应会在室温下长时间放置的高通量应用。

    在自然界中,DNA 聚合酶纠正延伸中的 DNA 链中核苷酸的错误并入的能力对于宿主生物体的存活是至关重要的。这种能力被称为“校正活性”,发生在 3' 到 5' 的方向。该活性还能使聚合酶去除 3' 末端突出的未配对核苷酸(A 突出端),产生平末端。

    在 72°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmol dNTP 转变成酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

    所有的 Bioline 聚合酶都有方便的 2 倍预混液形式可供使用,其中含有进行成功 PCR 所需的所有试剂和添加剂,但模板、引物和水除外。该配方不仅提供了方便和无障碍的 PCR 设置,而且还通过减少所需的移液步骤显著减少了人为错误、不准确性和污染的可能性。

    我们推荐的最终反应体积为 50 μL,需要使用 25 μL 的 2 倍预混液,并使用模板、引物和 PCR 级别的水补足 50 μL。

    虽然混合物的确切组成是专有信息,不过所有混合物均由反应缓冲液、镁、dNTP、聚合酶和添加剂组成,旨在保持聚合酶在混合物中稳定,并为 PCR 提供最佳条件。

    所有 Bioline PCR 混合物均以 2 倍浓度提供,只需要用户添加模板、引物和 PCR 级别的水,直至达到 1 倍最终浓度。

    如果可能的话,我们建议对受影响的样品进行额外的纯化,例如,客户对用 SureClean Plus 纯化含有腐殖酸的样品有非常丰富的经验。或者,降低模板浓度将有助于最大程度减少抑制剂。可增加引物量,但不要超过建议的限值。

    单击此处请求样本。您将在两个工作日内收到一封包含送货详情的确认电子邮件。



    评价

    "“MyFi Mix 比我们目前的 Taq 更为灵敏且易于使用/设置。不错的产品。” ..."

    "“与 HiFi Hot-Start 相比,MyFi 产生更高产量的所需扩增子。” ..."

    "“MyFi 在这种条件下提供了很好的 PCR 产物,而 ExTaq 却没有实现扩增。” ..."

    "“APEX 预混液无法扩增预期产物,但 MyFi 成功扩增了预期大小的条带,在更高的退火温度下产生了更少的非特异性扩增子。 ..."