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    目录号
    尺寸
    BIO-52076
    10 Preps
    BIO-52077
    50 preps

    说明

    将硫氰酸胍或盐酸胍裂解的严格性以及二氧化硅膜柱纯化的速度和纯度相结合,高效地纯化总 RNA。

    产品特色

    使用 ISOLATE II RNA Plant Kit 从 20 mg 冻干的拟南芥芽叶中分离 RNA。将提取的 RNA 进行 2 倍连续稀释(泳道 1-7)并使用 MyTaq One-Step RT-PCR Kit 进行 PCR。结果表明获得了高质量的 RNA,可用于非常灵敏的 cDNA 合成和 PCR 而无需进一步纯化。

    产品说明

    ISOLATE II RNA Plant Kit 提供了一种简单、高效的柱分离方法,可从各种植物材料(包括叶、皮、根茎和果实)中分离总 RNA,而无需使用苯酚等有害试剂。

    ISOLATE II RNA Plant Kit 将硫氰酸胍裂解的严格性以及二氧化硅膜纯化的速度和易用性相结合,提供了一种从大多数植物细胞(包括植物组织、叶、皮、根茎和果实)中纯化高质量总 RNA 的快速方法。

    有些植物组织(如玉米胚乳和丝状真菌菌丝)在硫氰酸胍中的裂解效果不佳并且会固化,从而导致低产量,因此还提供了盐酸胍裂解缓冲液供选用。使用分离柱选择性地去除残留的污染 DNA,但对于超灵敏的应用,残余的 DNA 可以使用试剂盒提供的不含 RNase 的 DNase I 去除。 

    ISOLATE II RNA Plant Kit 设计用于在 RT-qPCR 中与 SensiFAST cDNA Synthesis KitSensiFAST Real-Time PCR KitSensiFAST One-Step Real-Time RT-PCR Kit 结合使用以提供最佳性能。此外,ISOLATE II RNA Plant Kit 还可用于在使用 Tetro cDNA Synthesis Kit 和来自 Bioline PCR 产品系列的任何酶(包括MyTaq DNA Polymerase)进行 RT-PCR 扩增之前纯化样品。

    应用

    • RT-qPCR
    • 终点 RT-PCR
    • Northern 印迹、点印迹和狭线印迹
    • 检测分析
    • Poly A+ RNA 筛选
    • RNA 测序
    Main
    从各种植物组织(包括叶、皮、根茎和果实)中快速纯化高质量的总 RNA。

    ISOLATE II 指南

    下载 ISOLATE II 指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

    10 次制备

    50 次制备

    ISOLATE II Filters

    10

    50

    ISOLATE II RNA Mini Columns

    10

    50

    Collection Tubes (2 mL)

    30

    150

    Collection Tubes (1.5 mL)

    10

    50

    Lysis Buffer RLY

    10 mL

    25 mL

    Lysis Buffer RLS

    10 mL

    25 mL

    Wash Buffer RW1

    15 mL

    15 mL

    Wash Buffer RW2

    6 mL

    12 mL

    Membrane Desalting Buffer MEM

    10 mL 

    25 mL

    Reaction Buffer for DNase I RDN

    7 mL

    7 mL

    DNase I, RNase-free (lyophilized)

    1 瓶

    1 瓶 

    RNase-free water

    13 mL

    13 mL

    Bench Protocol Sheet

    1

    1

    储存和稳定性

    所有组件均应在室温下干燥储存。

    在推荐条件下储存并正确处理时,试剂的全部活性将保持至外盒标签上指示的有效期。

    运输条件

    环境温度。



    常见问题解答

    ISOLATE II 试剂盒附带的柱可能看起来很相似,但是每种类型都经过了优化,可以在相应试剂盒提供的缓冲液系统内使用。在试剂盒之间交换柱(或缓冲液)可能导致无论如何都无法回收核酸,或至少严重损害纯化。

    如果仅进行了样品裂解,DNA/RNA 提取过程是可以中断的。可以将样品混匀并裂解,用于 RNA 提取之前将其保存在冰箱中。用柱进行纯化 RNA 不能中断,我们建议在柱纯化过程中避免延迟。如果无法避免延迟,则应该将这些柱存放在冰上。

    有几种选择。如果您正在使用我们的柱基提取试剂盒,如 ISOLATE II RNA Mini Kit,则需要减少此类样品的样品量或增加裂解缓冲液 RLY 的量以防止柱堵塞。另一种选择是用 TRIsure (BIO-38032) 进行预提取,并用基于柱的 ISOLATE II RNA 试剂盒纯化含有 RNA 的水相。您应遵循 TRIsure 方案,直到相分离步骤。然后将水相与一定体积的乙醇混合并将其加样到柱上。此时您应该继续常规的 ISOLATE II RNA Mini Kit 方案。

    像往常一样进行处理,只是去除 RNAlater 溶液。

    RNA 样品的琼脂糖凝胶分析既有价值又有误导性。凝胶上的条带模式不仅可以指示样品的质量,同样也可以仅指示电泳槽、缓冲液或琼脂糖被 RNase 污染的情况。更安全的方法是使用生物分析仪,并查看 RIN 值(RNA 完整性指数),该值应尽可能接近 10,表明 RNA 未降解。分光光度计(最好是微流体型)也可以用来确定 A260 与 A280 的比值,以确定纯度。

    所有这些方法都可用于了解通常以 rRNA 和 tRNA 为主的总 RNA 的质量。琼脂糖凝胶显示有丰富的 18S 和 23S rRNA,但是在分析中没有什么感兴趣的转录物,这种情况并不少见。理想情况下,RNA 质量控制应使用 RT-PCR 或 RT-qPCR 评估是否存在常见转录物(来自参考基因,如 GAPDH)。

    如果 RNA 的产量很低,最好首先检查所用的所有溶液和使用的设备是否基本不含 RNase。应使用质量最高的现有试剂制备溶液,最好是具有分析证书,证明其不含 DNase 和 RNase。如果相信 RNase 污染极小,那么最好是能确保在裂解之前将样品适当混匀并在光学显微镜下检查裂解材料样品以确保所有细胞已破碎。

    已经被 RNase 污染(在处理过程中或者从另一实验室发送过来的样品)的 RNA 样品可以使用 ISOLATE II RNA Micro Kit 进行纯化。



    我们推荐使用 ISOLATE II Biofluids RNA Kit 提取无细胞 RNA。该试剂盒可分离所有大小的 RNA,并且与具有低 RNA 含量的极有限或具挑战性的样品来源兼容。

    我们推荐 ISOLATE II Biofluids RNA、miRNA 和 Plant miRNA 试剂盒。miRNA 试剂盒能够从植物细胞和组织中提取所有小 RNA 种类 (<200 nt),并可同时从同一样品中纯化出高质量的大 RNA (>200 nt)。ISOLATE II miRNA Kit 的开发目的旨在克服使用苯酚基技术进行小 RNA 分离所观察到的偏倚,这归功于其专有的小 RNA 分离和富集技术,以及高度优化的化学特性。Biofluids RNA kit 可从大 RNA(病毒 RNA 和核糖体 RNA)和小 RNA(如 miRNA 和 siRNA)中分离所有大小的 RNA。ISOLATE II Biofluids RNA Kit 与具有低 RNA 含量的极有限或具挑战性的样品来源兼容。



    裂解缓冲液 RLY 和 RLS 分别含有硫氰酸胍和盐酸胍。裂解缓冲液 RLY 在大多数情况下有效,由于其较强的变性特性而被推荐用于大多数植物材料的裂解。不过一些植物组织或真菌可在 RLY 中固化,无法进行 RNA 纯化,应该使用缓冲液 RLS。