• 订购

    目录号
    尺寸
    BIO-52074
    10 Preps
    BIO-52075
    50 Preps

    说明

    使用设计用于以极小体积洗脱的创新二氧化硅膜柱从极少量的样品中高效纯化总 RNA,从而得到高 RNA 浓度。

    产品特色

    • 快速 – 在短至 40 分钟内从 12 种样品中简便地提取高纯度的总 RNA,是适合所有应用的理想之选
    • 高性能 – 从单一细胞、激光捕获或流式分选细胞、冷冻切片和少量的组织样品(包括活检样品)高效回收高质量 RNA
    • 安全 – 无有害的苯酚/氯仿萃取、氯化铯离心、氯化锂或乙醇沉淀
    • 浓缩 – 小洗脱体积确保反应体积在下游应用中保持低水平,从而提高反应效率
    • 方便 – 包括所有必要的组件,包括过滤器(破碎器)和 DNase I

    产品说明

    ISOLATE II RNA Micro Kit 提供了一种简单、高效的柱分离方法,可从各种起始材料中分离总 RNA,而无需使用苯酚等有害试剂。

    ISOLATE II RNA Micro Kit 将硫氰酸胍裂解的严格性以及二氧化硅膜纯化的速度和易用性相结合,提供了一种从多种样品材料纯化高质量总 RNA 的快速方法,这些材料包括单一细胞、培养细胞团块、冰冻切片、激光捕获或流式分选的细胞以及少量的组织(例如组织活检材料)。

    对于对极少量 DNA 敏感的应用,可以使用试剂盒提供的不含 RNase 的 DNase I 进行方便的柱上 DNase 处理以去除残留 DNA。 

    ISOLATE II RNA Micro Kit 设计用于在 RT-qPCR 中与 SensiFAST cDNA Synthesis KitSensiFAST Real-Time PCR Kit SensiFAST One-Step Real-Time RT-PCR Kit 结合使用以提供最佳性能。此外,ISOLATE II RNA Micro Kit 可用于在使用 Tetro cDNA Synthesis Kit 和来自 Bioline PCR 产品系列的任何酶(包括 MyTaq DNA Polymerase)进行 PCR 和 RT-PCR 扩增之前纯化样品。

    应用

    • RT-qPCR
    • 终点 RT-PCR
    • Northern 印迹、点印迹和狭线印迹
    • 检测分析
    • RNA 保护测定
    • RNA 测序
    Main
    从少量样品中快速纯化高质量的总 RNA。

    ISOLATE II RNA Micro Kit 客户评价

    ISOLATE II 指南

    下载 ISOLATE II 指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    我的目标是从少量原代细胞中分离尽可能多的 RNA,然后用于进一步的 qPCR 实验。在 Bioline 产品(ISOLATE II RNA Micro Kit 和 SensiFAST cDNA Synthesis Kit)的帮助下,用最少量的样品就能得到最好的结果。

    德国萨兰大学医学中心的 Barth 女士

    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

    10 次制备

    50 次制备

    ISOLATE II Filters

    10

    50 

    ISOLATE II RNA Micro Columns & Collection Tubes

    10

    50

    Collection Tubes (2 mL)

    30

    150

    Collection Tubes (1.5 mL)

    10

    50 

    Lysis Buffer RLY

    2 x 1.8 mL

    25 mL

    Wash Buffer RW1

    2 x 1 mL

    15 mL

    Wash Buffer RW2

    2 mL

    7 mL

    Membrane Desalting Buffer MEM

    1.8 mL

    10 mL

    Reaction Buffer for DNase I RDN

    0.5 ml

    3 ml

    DNase, RNase-free (lyophilized)

    1 瓶

    1 瓶

    Carrier RNA

    300 µg

    300 µg

    Reducing Agent TCEP

    14 mg

    3 x 14 mg 

    RNase-free Water

    5 mL

    15 mL

    Product Manual

    1

    1

    Bench Protocol Sheet

    1

    1

    储存和稳定性

    所有试剂盒组件均应在室温下干燥储存。在推荐条件下储存并正确处理时,此试剂盒的全部活性将保持至外盒标签上指定的有效期。

    运输条件

    在环境温度下运输。



    常见问题解答

    ISOLATE II 试剂盒附带的柱可能看起来很相似,但是每种类型都经过了优化,可以在相应试剂盒提供的缓冲液系统内使用。在试剂盒之间交换柱(或缓冲液)可能导致无论如何都无法回收核酸,或至少严重损害纯化。

    如果仅进行了样品裂解,DNA/RNA 提取过程是可以中断的。可以将样品混匀并裂解,用于 RNA 提取之前将其保存在冰箱中。用柱进行纯化 RNA 不能中断,我们建议在柱纯化过程中避免延迟。如果无法避免延迟,则应该将这些柱存放在冰上。

    ISOLATE II RNA Micro Kit 包含用作载体 RNA 的 poly-A RNA。我们建议将 20 ng 载体 RNA 加入样品裂解物中。这样可以提高总 RNA 的回收率,但总体上取决于样品类型和 RNA 量。即使当寡 dT 用作逆转录的引物时,少量的 poly-A RNA 也不会干扰随后的实时 PCR。如果要在分离后进行 poly-A RNA 分离,则不应添加载体 RNA。也可使用其他类型的载体 RNA,如核糖体 RNA 或糖原,但不随该试剂盒提供。

    A230 值增加可能是由不同的物质,如碳水化合物、多肽和苯酚造成的。RNA 样品中 A230/A260 比很差主要是由于硫氰酸胍污染,用于 RNA 提取的几种试剂中存在硫氰酸胍,例如裂解缓冲液。与 A280/A260 比不同,它不会自动反映 RNA 质量差。目前关于该比值下限没有共识,主要是残留硫氰酸胍不影响下游应用的可靠性。不过,使用 RW2 进行一步额外的清洗有助于避免这个问题。而将液体从收集管中吸出,而非倒出可能会有所帮助。 



    可使用 ISOLATE II Plant DNA and RNA 试剂盒。这些试剂盒的裂解经过优化,可能对于裂解困难细菌和土壤样品中真菌的处理也有用

    要使回收大 RNA/DNA 片段效果最佳,有必要优化洗脱步骤。使用更大的体积进行洗脱,在离心之前用洗脱缓冲液孵育柱并重复洗脱步骤对提高回收率有帮助。为避免过度稀释,再次重新使用洗脱分数可能会有所帮助。



    有几种选择。如果您正在使用我们的柱基提取试剂盒,如 ISOLATE II RNA Mini Kit,则需要减少此类样品的样品量或增加裂解缓冲液 RLY 的量以防止柱堵塞。另一种选择是用 TRIsure (BIO-38032) 进行预提取,并用基于柱的 ISOLATE II RNA 试剂盒纯化含有 RNA 的水相。您应遵循 TRIsure 方案,直到相分离步骤。然后将水相与一定体积的乙醇混合并将其加样到柱上。此时您应该继续常规的 ISOLATE II RNA Mini Kit 方案。

    像往常一样进行处理,只是去除 RNAlater 溶液。

    我们推荐使用 ISOLATE II Biofluids RNA Kit 提取无细胞 RNA。该试剂盒可分离所有大小的 RNA,并且与具有低 RNA 含量的极有限或具挑战性的样品来源兼容。

    我们推荐 ISOLATE II Biofluids RNA、miRNA 和 Plant miRNA 试剂盒。miRNA 试剂盒能够从植物细胞和组织中提取所有小 RNA 种类 (<200 nt),并可同时从同一样品中纯化出高质量的大 RNA (>200 nt)。ISOLATE II miRNA Kit 的开发目的旨在克服使用苯酚基技术进行小 RNA 分离所观察到的偏倚,这归功于其专有的小 RNA 分离和富集技术,以及高度优化的化学特性。Biofluids RNA kit 可从大 RNA(病毒 RNA 和核糖体 RNA)和小 RNA(如 miRNA 和 siRNA)中分离所有大小的 RNA。ISOLATE II Biofluids RNA Kit 与具有低 RNA 含量的极有限或具挑战性的样品来源兼容。



    RNA 样品的琼脂糖凝胶分析既有价值又有误导性。凝胶上的条带模式不仅可以指示样品的质量,同样也可以仅指示电泳槽、缓冲液或琼脂糖被 RNase 污染的情况。更安全的方法是使用生物分析仪,并查看 RIN 值(RNA 完整性指数),该值应尽可能接近 10,表明 RNA 未降解。分光光度计(最好是微流体型)也可以用来确定 A260 与 A280 的比值,以确定纯度。

    所有这些方法都可用于了解通常以 rRNA 和 tRNA 为主的总 RNA 的质量。琼脂糖凝胶显示有丰富的 18S 和 23S rRNA,但是在分析中没有什么感兴趣的转录物,这种情况并不少见。理想情况下,RNA 质量控制应使用 RT-PCR 或 RT-qPCR 评估是否存在常见转录物(来自参考基因,如 GAPDH)。

    如果 RNA 的产量很低,最好首先检查所用的所有溶液和使用的设备是否基本不含 RNase。应使用质量最高的现有试剂制备溶液,最好是具有分析证书,证明其不含 DNase 和 RNase。如果相信 RNase 污染极小,那么最好是能确保在裂解之前将样品适当混匀并在光学显微镜下检查裂解材料样品以确保所有细胞已破碎。

    已经被 RNase 污染(在处理过程中或者从另一实验室发送过来的样品)的 RNA 样品可以使用 ISOLATE II RNA Micro Kit 进行纯化。



    评价

    "我们使用 Isolate II RNA Micro Kit、SensiFAST cDNA Synthesis Kit 和 SensiFAST SYBR No-R ..."

    "“我的目标是从少量原代细胞中分离尽可能多的 RNA,然后用于进一步的 qPCR 实验。
    在 Bioline 产品(ISOLATE II RNA M ..."