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    目录号
    尺寸
    BIO-52055
    10 preps
    BIO-52056
    50 preps
    BIO-52057
    250 Preps

    说明

    将起始材料的快速 SDS/碱裂解与二氧化硅膜柱纯化的速度和纯度相结合,高效地纯化质粒 DNA。

    产品特色

    • 快速 – 简化的方案可在短至 15 分钟的时间内提取 18 个质粒样品
    • 高效 – 快速的 SDS/碱裂解和高效的柱结合,可高产量回收所有质粒分子
    • 高性能 – 高效提取适用于所有下游应用的高纯度质粒 DNA
    • 灵活 – 从所有革兰氏阳性细菌中可靠地回收高拷贝和低拷贝质粒

    产品说明

    ISOLATE II Plasmid Mini Kit 提供了一种简单、高效的柱分离方法,用于从细菌培养物中分离质粒 DNA,而无需使用苯酚等有害试剂。

    ISOLATE II Plasmid Mini Kit 将 SDS/碱裂解与二氧化硅膜纯化的速度和易用性相结合,提供了一种纯化高质量质粒 DNA 的快速方法。为分离高拷贝质粒、从大肠杆菌中分离低拷贝质粒、P1 构建体和柯斯质粒 DNA 以及从芽孢杆菌、葡萄球菌、双歧杆菌棒状杆菌等革兰氏阳性细菌中分离质粒提供了单独的方案。

    ISOLATE II Plasmid Mini Kit 设计用于在克隆、测序以及终点 PCR 中与 Bioline PCR 产品系列的任何酶(包括 MyTaq DNA Polymerase)结合使用提供最佳性能。此外,ISOLATE II Plasmid Mini Kit 还可与 SensiFAST Real-Time PCR Kit 结合使用进行高效 qPCR。

    应用

    • 克隆
    • 测序
    • 限制性酶切
    • 标记
    • 终点 PCR
    • qPCR
    • 转染
    • 荧光测序
    • 体外转录
    Main
    从细菌中快速纯化高质量质粒 DNA。

    ISOLATE II 指南

    下载 ISOLATE II 指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

    10 次制备

    50 次制备

    250 次制备

    ISOLATE II Plasmid Mini Spin Columns

    10

    50

    250

    Collection Tubes (2 mL)

    10

    50

    250

    Resuspension Buffer P1

    5 mL

    15 mL

    75 mL

    Lysis Buffer P2

    5 mL

    15 mL

    3 x 25 mL

    Neutralization Buffer P3

    5 mL

    20 mL

    100 mL

    Wash Buffer PW1

    6 mL

    30 mL

    2 x 75 mL

    Wash Buffer PW2

    2 mL

    2 x 6 mL

    2 x 20 mL

    Elution Buffer P

    5 mL

    15 mL

    75 mL

    RNase A (lyophilized)

    2 mg

    6 mg 

    30 mg

    Product Manual

    1

    1

    1

    Bench Protocol Sheet

    1

    1

    1

    储存和稳定性

    所有试剂盒组件均应在室温下干燥储存。在推荐条件下储存并正确处理时,试剂盒试剂的全部活性将保持至外盒标签上指示的有效期。

    :RNase A 以冻干形式供应。加入重悬缓冲液 P1 后,RNase A 溶液应在 4°C 下储存。当在 4°C 下储存时,RNase A 溶液保持稳定至少 6 个月。

    运输条件

    环境温度。



    常见问题解答

    ISOLATE II 试剂盒附带的柱可能看起来很相似,但是每种类型都经过了优化,可以在相应试剂盒提供的缓冲液系统内使用。在试剂盒之间交换柱(或缓冲液)可能导致无论如何都无法回收核酸,或至少严重损害纯化。

    如果仅进行了样品裂解,DNA/RNA 提取过程是可以中断的。可以将样品混匀并裂解,用于 RNA 提取之前将其保存在冰箱中。用柱进行纯化 RNA 不能中断,我们建议在柱纯化过程中避免延迟。如果无法避免延迟,则应该将这些柱存放在冰上。

    洗脱缓冲液适用于限制性内切酶消化、测序和 PCR 等应用。可以使用不含 DNase 的水进行洗脱,但是产量略低。

    该试剂盒的洗脱缓冲液不含可能干扰 PCR 或测序等下游应用的 EDTA。

    因 ISOLATE II Kit(包括 ISOLATE II Plasmid Mini Kit)所使用的高质量柱,可以使用大体积的培养基作为起始材料。使用的确切体积取决于实验中使用的菌株和质粒,但是 ISOLATE II Plasmid Mini Kit 柱能够处理 5 mL LB 中生长的大肠杆菌的生物质至 OD600 约为 3 的生物质。使用更大体积的培养基时,确保在离心培养基后将尽可能多的废培养基从生物质颗粒上方去除很重要。如果仔细操作的话,可以使用多达 15 mL 的细菌培养基作为起始材料,这样可提高低拷贝质粒 DNA 的产量。但是,相比于标准方案,应使用两倍的缓冲液 P1、P2 和 P3 体积。

    产量低的最常见原因是生物质颗粒在裂解之前未能正确重悬。细菌有团块则裂解溶液不能进入所有的细胞,然后这些未裂解的细胞随后被离心。由于澄清的裂解物不完全转移到柱中,尤其是当加入缓冲液 P3 产生的白色沉淀物松散时,也可能导致产量低,从而难以回收最大量的裂解物。极高的生物质浓度也可能导致低质粒产量。可能原因是柱过载,所以每毫克生物质的产量比预期的少。然而,使用富集培养基,如 SOC 或 TY 代替 LB,可以得到高生物质但极低的质粒浓度。

    ISOLATE II Plasmid Mini Kit 可用于纯化和浓缩裸质粒 DNA。可以将 DNA 直接加样到新鲜柱上,然后按照标准方案执行剩余的清洗、干燥和洗脱步骤。可以通过减少最后阶段的洗脱体积来浓缩样品。但是通过使用 ISOLATE II PCR and Gel Kit 以及将质粒样品当作 PCR 产物进行处理可以获得更好的回收率。

    要使回收大 RNA/DNA 片段效果最佳,有必要优化洗脱步骤。使用更大的体积进行洗脱,在离心之前用洗脱缓冲液孵育柱并重复洗脱步骤对提高回收率有帮助。为避免过度稀释,再次重新使用洗脱分数可能会有所帮助。此外,将洗脱缓冲液加热至 70°C 可能对 DNA 洗脱有益。