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    目录号
    尺寸
    BIO-52083
    25 Preps

    说明

    通过结合硫氰酸胍裂解的严紧性与硅胶膜纯化的速度和纯度,高效地纯化 miRNA 和总 RNA。

    产品特色

    • 快速 – 方案简化,可仅在 25 分钟内从各种样本类型中可靠地提取所有 miRNA 种类
    • 特异 – 专门为提取 miRNA 群而开发的缓冲液条件和纯化柱基质 
    • 高效 – 所有小 RNA 种类 (<200 nt) 都能从极其少量的样本中获得出色的回收
    • 无偏差 – 基于柱的纯化可消除存在有机溶剂时可能发生的小 RNA 分子群中的偏差
    • 用途广泛 – 可从各种样本中提取高纯度的 miRNA,包括细胞、组织、细菌和体液。
    • 方便 - 用于平行提取所有较大 RNA 种类的任选方案,从而能够提取总 RNA

    产品说明

    ISOLATE II miRNA Kit 提供了一种简单、高效的基于纯化柱的方法,用于从各种起始材料中分离 miRNA 和总 RNA,而不需要使用苯酚等有害试剂,据报道这些试剂可在选择的小 RNA 的回收中带来显著的偏差。

    通过结合硫氰酸胍裂解的严密性与两个硅胶膜纯化柱的速度和易用性,ISOLATE II miRNA Kit 可从培养的动物细胞、小组织样本、细菌细胞、植物和血液中快速纯化高质量的总 RNA(第一个纯化柱)和 miRNA(第二个纯化柱)。

    对于对极少量 DNA 敏感的应用,可以使用随试剂盒提供的无 Rnase 的 DNase I 进行方便的柱上 DNase 处理,以去除剩余的 DNA 残留量。

    ISOLATE II miRNA Kit 旨在通过结合,在 miRNA 表达分析和定量分析中使用 qPCR、微阵列、小 RNA-Seq 的小 RNA 文库构建以及单细胞检测来实现最佳性能。

    应用

    • RT-qPCR
    • miRNA 分析
    • 终点 RT-PCR
    • 检测分析
    • Northern 印迹
    • 组织表达分析
    • 发现生物标志物
    • 微阵列分析
    • RNA 测序
    Main
    从培养细胞、组织和体液中快速纯化高质量的 miRNA 和总 RNA。

    ISOLATE II 指南

    下载 ISOLATE II 指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂 25 次制备
    ISOLATE II Large RNA Removal Columns 25
    ISOLATE II miRNA Columns 25
    Collection Tubes (2 mL) 50
    Elution Tubes (1.7 mL) 50
    Lysis Buffer RX 40 mL
    Wash Buffer W1 38 mL
    DNase I Solution (RNase-free) 0.8 mL
    DNase I Reaction Buffer DRB 6 mL
    RNA Elution Buffer 6 mL
    Product Manual 1
    Bench Protocol Sheet 1

    储存和稳定性

    收货后应将 DNase I 储存在 -20°C 下。所有其他组分应在干燥和室温条件下储存。

    在推荐条件下储存并正确处理时,试剂的全部活性将保持至外盒标签上指示的有效期。

    运输条件

    环境温度。



    常见问题解答

    ISOLATE II 试剂盒附带的柱可能看起来很相似,但是每种类型都经过了优化,可以在相应试剂盒提供的缓冲液系统内使用。在试剂盒之间交换柱(或缓冲液)可能导致无论如何都无法回收核酸,或至少严重损害纯化。

    如果仅进行了样品裂解,DNA/RNA 提取过程是可以中断的。可以将样品混匀并裂解,用于 RNA 提取之前将其保存在冰箱中。用柱进行纯化 RNA 不能中断,我们建议在柱纯化过程中避免延迟。如果无法避免延迟,则应该将这些柱存放在冰上。

    可使用 ISOLATE II Plant DNA and RNA 试剂盒。这些试剂盒的裂解经过优化,可能对于裂解困难细菌和土壤样品中真菌的处理也有用

    有几种选择。如果您正在使用我们的柱基提取试剂盒,如 ISOLATE II RNA Mini Kit,则需要减少此类样品的样品量或增加裂解缓冲液 RLY 的量以防止柱堵塞。另一种选择是用 TRIsure (BIO-38032) 进行预提取,并用基于柱的 ISOLATE II RNA 试剂盒纯化含有 RNA 的水相。您应遵循 TRIsure 方案,直到相分离步骤。然后将水相与一定体积的乙醇混合并将其加样到柱上。此时您应该继续常规的 ISOLATE II RNA Mini Kit 方案。

    像往常一样进行处理,只是去除 RNAlater 溶液。

    我们推荐使用 ISOLATE II Biofluids RNA Kit 提取无细胞 RNA。该试剂盒可分离所有大小的 RNA,并且与具有低 RNA 含量的极有限或具挑战性的样品来源兼容。

    我们推荐 ISOLATE II Biofluids RNA、miRNA 和 Plant miRNA 试剂盒。miRNA 试剂盒能够从植物细胞和组织中提取所有小 RNA 种类 (<200 nt),并可同时从同一样品中纯化出高质量的大 RNA (>200 nt)。ISOLATE II miRNA Kit 的开发目的旨在克服使用苯酚基技术进行小 RNA 分离所观察到的偏倚,这归功于其专有的小 RNA 分离和富集技术,以及高度优化的化学特性。Biofluids RNA kit 可从大 RNA(病毒 RNA 和核糖体 RNA)和小 RNA(如 miRNA 和 siRNA)中分离所有大小的 RNA。ISOLATE II Biofluids RNA Kit 与具有低 RNA 含量的极有限或具挑战性的样品来源兼容。



    RNA 样品的琼脂糖凝胶分析既有价值又有误导性。凝胶上的条带模式不仅可以指示样品的质量,同样也可以仅指示电泳槽、缓冲液或琼脂糖被 RNase 污染的情况。更安全的方法是使用生物分析仪,并查看 RIN 值(RNA 完整性指数),该值应尽可能接近 10,表明 RNA 未降解。分光光度计(最好是微流体型)也可以用来确定 A260 与 A280 的比值,以确定纯度。

    所有这些方法都可用于了解通常以 rRNA 和 tRNA 为主的总 RNA 的质量。琼脂糖凝胶显示有丰富的 18S 和 23S rRNA,但是在分析中没有什么感兴趣的转录物,这种情况并不少见。理想情况下,RNA 质量控制应使用 RT-PCR 或 RT-qPCR 评估是否存在常见转录物(来自参考基因,如 GAPDH)。

    如果 RNA 的产量很低,最好首先检查所用的所有溶液和使用的设备是否基本不含 RNase。应使用质量最高的现有试剂制备溶液,最好是具有分析证书,证明其不含 DNase 和 RNase。如果相信 RNase 污染极小,那么最好是能确保在裂解之前将样品适当混匀并在光学显微镜下检查裂解材料样品以确保所有细胞已破碎。

    已经被 RNase 污染(在处理过程中或者从另一实验室发送过来的样品)的 RNA 样品可以使用 ISOLATE II RNA Micro Kit 进行纯化。