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    尺寸
    BIO-52086
    50 Preps

    说明

    通过结合硫氰酸胍裂解的严紧性与硅胶膜纯化的速度和纯度,可高效纯化总 RNA。

    产品特色

    • 快速 – 仅需 20 分钟即可完成高纯度总 RNA 提取,是所有应用的理想选择
    • 高效 – 高产量回收可实现从 RNA 含量极低的的样本(包括体液和病毒样本)中提取
    • 高性能 – 可从各种人类和动物体液中出色回收高质量的 RNA
    • 无偏差 – 经过优化,可从大 mRNA 和病毒 RNA 至小 RNA 种类(包括 miRNA 和 siRNA)回收所有 RNA 类型
    • 安全 – 无有害的苯酚/氯仿萃取、氯化铯离心、氯化锂或乙醇沉淀

    产品说明

    ISOLATE Fecal DNA Kit 提供了一种简单、高效的基于纯化柱的方法,用于从各种起始材料中分离总 DNA,而无需使用诸如苯酚等有害试剂。

    通过结合硫氰酸胍裂解的严密性以及硅胶膜纯化的速度和易用性,ISOLATE II Biofluid RNA Kit 可从体液(包括血液、血清、血浆、尿液、唾液和脑脊液)中快速纯化高质量总 RNA。

    使用基因组 DNA 去除柱去除污染的基因组 DNA,但对于对极少量 DNA 极其敏感的应用,可以使用随试剂盒提供的无 Rnase 的 DNase I 进行 DNase 处理,以去除剩余的 DNA 残留量。

    ISOLATE II Biofluid RNA Kit 适用于与 SensiFAST cDNA Synthesis Kit 和 SensiFAST Real-Time PCR Kit 或 SensiFAST One-Step Real-Time RT-PCR Kit 结合使用,可在 RT-qPCR 中实现最佳性能。此外,ISOLATE II Biofluid RNA Kit 可用于在使用 Tetro cDNA Synthesis Kit 和 Bioline PCR 产品组合中的任何酶(包括 MyTaq DNA 聚合酶)进行 PCR 和 RT-PCR 扩增前对样本进行纯化。

    应用

    • RT-qPCR
    • 终点 RT-PCR
    • Northern 印迹、点印迹和狭线印迹
    • 检测分析
    • Poly A+ RNA 筛选
    • RNA 测序
    • 发现生物标志物
    Main
    从血液、血清、血浆、尿液、唾液和脑脊液中快速纯化高质量的 RNA。

    ISOLATE II 指南

    下载 ISOLATE II 指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂 50 次制备
    ISOLATE II RNA Columns 50
    ISOLATE II Genomic DNA Removal Columns 50
    Collection Tubes (2 mL) 100
    Elution Tubes (1.7 mL) 50 
    Lysis Buffer RX 40 mL
    Wash Buffer W1 38 mL
    DNase I Solution (RNase-free) 0.8 mL
    DNase I Reaction Buffer DRB 6 mL
    RNA Elution Buffer 6 mL
    Product Manual 1
    Bench Protocol Sheet 1

    储存和稳定性

    收货后应将 DNase I 溶液储存在 -20°C 下。所有其他组分应在干燥和室温条件下储存。

    在推荐条件下储存并正确处理时,试剂的全部活性将保持至外盒标签上指示的有效期。

    运输条件

    环境温度



    常见问题解答

    ISOLATE II 试剂盒附带的柱可能看起来很相似,但是每种类型都经过了优化,可以在相应试剂盒提供的缓冲液系统内使用。在试剂盒之间交换柱(或缓冲液)可能导致无论如何都无法回收核酸,或至少严重损害纯化。

    如果仅进行了样品裂解,DNA/RNA 提取过程是可以中断的。可以将样品混匀并裂解,用于 RNA 提取之前将其保存在冰箱中。用柱进行纯化 RNA 不能中断,我们建议在柱纯化过程中避免延迟。如果无法避免延迟,则应该将这些柱存放在冰上。

    建议不要超过最大体积 200 µL,以防柱堵塞。可以拆分样本,并行使用数个柱。

    A230 值增加可能是由不同的物质,如碳水化合物、多肽和苯酚造成的。RNA 样品中 A230/A260 比很差主要是由于硫氰酸胍污染,用于 RNA 提取的几种试剂中存在硫氰酸胍,例如裂解缓冲液。与 A280/A260 比不同,它不会自动反映 RNA 质量差。目前关于该比值下限没有共识,主要是残留硫氰酸胍不影响下游应用的可靠性。不过,使用 RW2 进行一步额外的清洗有助于避免这个问题。而将液体从收集管中吸出,而非倒出可能会有所帮助。 



    可使用 ISOLATE II Plant DNA and RNA 试剂盒。这些试剂盒的裂解经过优化,可能对于裂解困难细菌和土壤样品中真菌的处理也有用

    有几种选择。如果您正在使用我们的柱基提取试剂盒,如 ISOLATE II RNA Mini Kit,则需要减少此类样品的样品量或增加裂解缓冲液 RLY 的量以防止柱堵塞。另一种选择是用 TRIsure (BIO-38032) 进行预提取,并用基于柱的 ISOLATE II RNA 试剂盒纯化含有 RNA 的水相。您应遵循 TRIsure 方案,直到相分离步骤。然后将水相与一定体积的乙醇混合并将其加样到柱上。此时您应该继续常规的 ISOLATE II RNA Mini Kit 方案。

    像往常一样进行处理,只是去除 RNAlater 溶液。

    我们推荐使用 ISOLATE II Biofluids RNA Kit 提取无细胞 RNA。该试剂盒可分离所有大小的 RNA,并且与具有低 RNA 含量的极有限或具挑战性的样品来源兼容。

    我们推荐 ISOLATE II Biofluids RNA、miRNA 和 Plant miRNA 试剂盒。miRNA 试剂盒能够从植物细胞和组织中提取所有小 RNA 种类 (<200 nt),并可同时从同一样品中纯化出高质量的大 RNA (>200 nt)。ISOLATE II miRNA Kit 的开发目的旨在克服使用苯酚基技术进行小 RNA 分离所观察到的偏倚,这归功于其专有的小 RNA 分离和富集技术,以及高度优化的化学特性。Biofluids RNA kit 可从大 RNA(病毒 RNA 和核糖体 RNA)和小 RNA(如 miRNA 和 siRNA)中分离所有大小的 RNA。ISOLATE II Biofluids RNA Kit 与具有低 RNA 含量的极有限或具挑战性的样品来源兼容。



    RNA 样品的琼脂糖凝胶分析既有价值又有误导性。凝胶上的条带模式不仅可以指示样品的质量,同样也可以仅指示电泳槽、缓冲液或琼脂糖被 RNase 污染的情况。更安全的方法是使用生物分析仪,并查看 RIN 值(RNA 完整性指数),该值应尽可能接近 10,表明 RNA 未降解。分光光度计(最好是微流体型)也可以用来确定 A260 与 A280 的比值,以确定纯度。

    所有这些方法都可用于了解通常以 rRNA 和 tRNA 为主的总 RNA 的质量。琼脂糖凝胶显示有丰富的 18S 和 23S rRNA,但是在分析中没有什么感兴趣的转录物,这种情况并不少见。理想情况下,RNA 质量控制应使用 RT-PCR 或 RT-qPCR 评估是否存在常见转录物(来自参考基因,如 GAPDH)。

    如果 RNA 的产量很低,最好首先检查所用的所有溶液和使用的设备是否基本不含 RNase。应使用质量最高的现有试剂制备溶液,最好是具有分析证书,证明其不含 DNase 和 RNase。如果相信 RNase 污染极小,那么最好是能确保在裂解之前将样品适当混匀并在光学显微镜下检查裂解材料样品以确保所有细胞已破碎。

    已经被 RNase 污染(在处理过程中或者从另一实验室发送过来的样品)的 RNA 样品可以使用 ISOLATE II RNA Micro Kit 进行纯化。



    要使回收大 RNA/DNA 片段效果最佳,有必要优化洗脱步骤。使用更大的体积进行洗脱,在离心之前用洗脱缓冲液孵育柱并重复洗脱步骤对提高回收率有帮助。为避免过度稀释,再次重新使用洗脱分数可能会有所帮助。此外,将洗脱缓冲液加热至 70°C 可能对 DNA 洗脱有益。