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    目录号
    尺寸
    BIO-21046
    250 Units
    BIO-21047
    500 Units
    BIO-21048
    5000 Units

    说明

    IMMOLASE™ 是一种热激活的热稳定 DNA 聚合酶。与标准聚合酶相比,IMMOLASE 可提供高产率和增加特异性,并且可以消除非特异性结合的存在,例如引物二聚体和错误引发的产物。

    产品特色

    • 高性能 - 稳健的聚合酶
    • 化学热启动 PCR 酶 - 消除非特异性结合
    • 反应需要活化步骤 - 允许在室温下方便地设置反应
    • 适合 TA 克隆 - 留下 ´A´ 突出端

    产品说明

    IMMOLASE™ 是一种热激活的热稳定 DNA 聚合酶,与标准聚合酶相比,具有高产率和高特异性。IMMOLASE 可消除非特异性物质的存在,例如引物二聚体和错误引发的产物。

    IMMOLASE 在室温下无活性,需要在 PCR 循环之前通过热处理激活 10 分钟。这为反应建立提供了更大的灵活性,并允许在室温下预混合 PCR 试剂。随后,可根据热稳定 DNA 聚合酶的首选方案处理反应。

    应用

    • 用于多重反应
    • 产物适用于 TA 克隆
    Main

    PCR 酶指南

    下载 PCR 酶指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    PCR 选择图

    根据您的仪器和样本要求选择最适合于您研究的试剂

    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    产品

    250 单位

    500 单位

    5000 单位

    IMMOLASE DNA Polymerase

    1 x 50 µL

    1 x 100 µL

    10 x 100 µL

    10x ImmoBuffer

     1.2 mL

    2 x 1.2 mL

    20 x 1.2mL

    50 mM MgCl2 Solution

     1.2 mL

    1 x 1.2 mL

    10 x 1.2 mL

    浓度

    5 u/µL

    储存和稳定性

    所有组件应在收到后储存在 -20°C 下以保持最佳稳定性。应避免重复冻/融循环。在推荐条件下储存并正确处理时,试剂的全部活性将保持至外盒标签上指定的有效期。

    运输条件

    以干冰或蓝冰运输。



    常见问题解答

    95°C 下 IMMOLASE DNA Polymerase 需要的热活化时间为 10 分钟。



    与大多数标准应用一样,IMMOLASE DNA Polymerase 非常适合以下应用:

    -          高通量应用

    -          多重 PCR

    -          TA 克隆

    IMMOLASE DNA Polymerase 按照 13485 质量管理体系生产,适合作为 IVD 组件用于进一步生产。



    IMMOLASE DNA Polymerase 的特性如下:

    • 热活化:95°C 下 10 分钟
    • 速度:15-30 s/kb(取决于模板)
    • 扩增的长度:约 5 kb(基因组 DNA)

    最佳延伸温度:72°C



    Bioline 自豪地向您提供高质量的聚合酶以满足您的要求。为了帮助选择最适合您特定应用的酶,请参阅我们的酶选择工具

    我们所有的聚合酶保证自购买之日起 12 个月内保持稳定。在这段时间内,酶应保存在 -20°C 下,以保持最佳的活性。

    请注意:我们不建议在 -80°C 下储存聚合酶,因为活性位点上可能形成冰晶,从而影响或破坏酶的活性。

    PCR 是一项具有挑战性的技术,需要对各种参数进行优化以获得最佳结果。如果遇到问题,通过处理一些问题即可轻松解决。请参阅 PCR 故障排除指南,以获取建议并获得具体问题的帮助。

    观察 推荐的解决方案
    无或低 PCR 产量  酶浓度太低 – 以 0.5 U 的增量增加酶的量。
     引物降解 – 检查引物的质量和期限。
     镁浓度太低 – 以 0.25 mM 的增量从起始浓度 1.75 mM 开始增加浓度。
     引物浓度未优化。调整引物浓度 (0.3-1 µM);确保两种引物具有相同的浓度。
     模板浓度太低 – 增加模板的浓度。
     进行阳性对照以确保酶、dNTP 和缓冲液不被降解和/或污染。
    多个条带  引物退火温度太低。提高退火温度。引物退火温度应该比计算的引物 Tm 至少低 5°C。
     在冰上制备预混液或使用热活化聚合酶。
     对于特异性低的问题。尝试加入 3% 的 DMSO(未提供)以提高特异性。
    污点或伪影  模板浓度太高。制备连续稀释模板。
     循环次数太多。将循环减少 3-5 次,以去除非特异性条带。
     酶浓度太高 - 以 0.5 U 的增量减少酶的量。
     延伸时间太长。以 0.5-1 分钟的增量缩短延伸时间。


    这些术语是指在进行 PCR 时要考虑的参数,是根据您的需要选择正确的酶的重要特征。因此理解其含义至关重要:产量:PCR 反应中产生的 DNA 量。保真度:将正确的 dNTP 并入延伸的 DNA 链中的酶的准确性。持续合成能力:聚合酶与模板相关的时间长度,以及因此可以扩增的片段大小。特异性:衡量反应中产生的不需要的副产物的度量。

    室温下的 PCR 设置过程中,标准聚合酶会有一些活性。使用热启动聚合酶时,该酶在室温下无活性,因此降低了由于这些误引发的寡核苷酸而引起的反应中非特异性产物的风险。此特点使得这类聚合酶非常适用于反应会在室温下长时间放置的高通量应用。

    在 72°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmol dNTP 转变成酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

    所有的 Bioline 聚合酶都有方便的 2 倍预混液形式可供使用,其中含有进行成功 PCR 所需的所有试剂和添加剂,但模板、引物和水除外。该配方不仅提供了方便和无障碍的 PCR 设置,而且还通过减少所需的移液步骤显著减少了人为错误、不准确性和污染的可能性。

    MyTaq HS DNA 聚合酶可以很好地处理富含 GC 或重亚硫酸盐转化的 DNA 等困难样品。热启动尤其重要,因为它减少了引物二聚体和非特异性扩增。我们建议按照推荐的方案开始。如果需要优化,我们建议优化退火温度。由于亚硫酸盐转化后的 DNA 降解,增加模板和聚合酶的量可能有用。

    如果可能的话,我们建议对受影响的样品进行额外的纯化,例如,客户对用 SureClean Plus 纯化含有腐殖酸的样品有非常丰富的经验。或者,降低模板浓度将有助于最大程度减少抑制剂。可增加引物量,但不要超过建议的限值。