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    尺寸
    BIO-39025
    4 x 25µmol (4 x 250µl)
    BIO-39049
    4 x 100µmol (4 x 1ml)
    BIO-39026
    4 x 100µmol (4 x 4 x 250µl)

    说明

    即用型分子级 dNTP Set 包含浓度分别为 100 mM 的 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP 四种溶液。

    产品特色

    • 高质量 – 通过 HPLC 测定的纯度 >99%,非常适合用于 PCR 反应
    • 保质期长 – 无需分装
    • 方便 – 提供各种浓度,便于使用
    • 无酶 – 不含 DNase、RNase 和切口酶
    • 规格灵活 – 提供定制、批量和 OEM 规格

    产品说明

    高质量的 dNTP 是 PCR 成功的重要条件,因为污染杂质的存在会导致扩增灵敏度和产量降低。Bioline 的超纯 dNTP 经过高度严格的纯化步骤,纯度达到 99% 以上,并且经检测没有 DNase、RNase、蛋白酶和切口酶活性。其在各种应用中受到质量控制,从而确保了它们非常适合最灵敏的 PCR 技术。

    所有 Bioline dNTP 均在纯化水中以锂盐形式提供,因为锂盐比钠盐具有更强的抗反复冻融循环的能力,同时锂由于对各种微生物的抑菌活性而能够保持无菌状态,因此锂盐可提供更高的可靠性和更长的保质期。

    Bioline 是经 ISO 13485 认证的主要核苷酸生产商,如果您对核苷酸的要求超出了我们标准产品系列的范围,我们还可以提供定制、批量和 OEM 服务 (custom@bioline.com)。

    应用

    • DNA 扩增(标准、长片段、多重和高保真 PCR)
    • DNA 标记
    • RT-PCR
    • qPCR
    • 基因分型
    • cDNA 合成
    • DNA 测序
    Main
    即用型浓度的高质量脱氧核糖核酸 (dNTP)。

    资源

     

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

    BIO-39025

    BIO-39026

    BIO-39049

    dATP (100 mM)

     4x 250 μL

     4 x 4 x 250 μL

     4 x 1 mL

     dCTP (100 mM)

     4x 250 μL

     4 x 4 x 250 μL

     4 x 1 mL

     dGTP (100 mM)

     4 x 250 μL

     4 x 4 x 250 μL

     4 x 1 mL

     dTTP (100 mM)

     4 x 250 μL

     4 x 4 x 250 μL

     4 x 1 mL

    浓度

    • 每管 100 mM

    储存和稳定性

    超纯 dNTP 可在 -20°C 下储存 24 个月。避免多次冻/融循环。如需进行长期储存,建议分装。

    产品保持稳定至外盒标签上打印的有效期。

    运输条件

    以干冰或蓝冰运输。



    常见问题解答

    dNTP 或脱氧核苷三磷酸是 DNA 的“基础材料”。dNTP 的纯度和稳定性是获得成功 PCR 的两个重要因素。特别推荐将高度纯化的 dNTP 制剂用于敏感技术,例如长片段 PCR、RT-PCR、多重 PCR、诱变实验和实时应用。当模板的起始量很小时,dNTP 的纯度也很重要。

    dNTP 以混合物或产品组合供货。混合物保存在含有 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP 的预混合溶液的单管中。该溶液随时可用,已经过优化,可用于 PCR 和其他应用。产品组合包含四个独立试剂管,每种脱氧核苷酸一个管。dNTP 以冻干形式或以锂盐溶液的形式供货。

    是的。工厂预分配和认证的 dNTP 混合制剂通过最大程度减少移液步骤和错误(可能导致浓度不均衡)而提供了更多便利。可以将其直接添加到扩增反应中。使用 dNTP Mix 可确保实验的重现性。

    您的 PCR 检测可能会受到含有抑制剂的 dNTP 制剂的显著影响,这是由生产工艺缺陷造成的。在寻求纯度时必须考虑几个参数,每种 dNTP 最好不含脱氧核苷三磷酸、其他 dNTP、经修饰的核苷酸(甲基化、脱氨基等)、脱氧核苷二磷酸和单磷酸(dNDP 和 dNMP)、重过渡金属、无机焦磷酸盐 (PPi) 和核苷四磷酸盐。



    看情况。可以增加 DNA 的产量,但必须优化全部 PCR 反应,调整缓冲液、Mg2+ 等。这不是仅涉及核苷酸的问题。

    是的。Taq 聚合酶不能区分正确和经修饰的核苷酸,因此可能会发生点突变。使用校正 DNA 聚合酶时,由于甲基化/脱氨基核苷酸的存在会经常阻断 DNA 合成,所以该问题仅被部分消除。

    是的。dNTP 的质量对于诸如长模板扩增和实时 PCR 等复杂反应来说特别重要。使用校正 DNA 聚合酶时存在甲基化和脱氨基核苷酸可出现较差的结果。

    目前一致认为,确定 dNTP 制剂纯度的最严格的测试是长链 PCR 或在逆转录反应中合成长 cDNA。dNTP 质量也是实时检测的一个非常重要的因素。

    是的。用于储存核苷酸的最佳 pH 值为 7.5-8.2(20°C 下的 pH 值)。酸性 pH 会将 dNTP 水解成 dNDP 和 dNMP,不太适合 PCR 应用。在冻融循环期间,dNTP 溶液的 pH 值可以不同于 20°C 下的 pH 值。锂盐溶液的 pH 值不像钠盐那样依赖于温度,因此使用锂盐时,dNTP 重复冷冻和融化时,pH 值不会发生明显变化。这样可使 dNTP 制备更稳定,因此比使用钠盐具有更长的保质期。 



    是的。这些金属可促使 dNTP 降解为 dNDP 和 dNMP。因此,无金属制剂更稳定。

    dNTP 的酶合成使用高度特异的酶系统,该系统可消除杂质和 PCR 抑制剂,例如经修饰的核苷酸、PPi 和脱氧核苷四磷酸盐。由化学制造工艺产生的污染物,如痕量 dNDP、焦磷酸盐或其他离子(例如醋酸盐)可阻碍 PCR 反应。这些污染可能导致产量低下甚至无 PCR 产物。除非彻底纯化,否则化学合成的 dNTP 通常含有强效 PCR 抑制剂脱氧核苷四磷酸盐。化学合成也可导致脱氨基和其他核苷酸修饰,而 dNTP 的酶合成可避开这些风险。



    是的。dNTP 制剂通过歧化反应分解成核苷二磷酸和单磷酸。在高于 4℃ 的温度下,脱氧核苷酸的冻干制剂比核甘酸溶液制剂进行的歧化反应更快。相比之下,在 -20°C 时,两种形式的降解率都低于每年 1%。核苷酸溶液形式通常也比冻干形式更纯。一些冻干制剂的纯度可达 98% 或更高,但很难达到极纯溶液制剂的 > 99%。

    早前参考文献提到 dNTP 在锂盐中的溶解度比在钠盐中的更大。而且,储存在锂盐中的 dNTP 比钠盐中的 dNTP 更能抵抗反复的冻融。此外,其在整个储存期间保持无菌状态(研究显示锂离子对各种微生物具有显著的抑菌活性)。最后,使用锂盐核苷酸制剂可减少盐诱导的伪影,增加测序凝胶的清晰度。锂盐非常适合 PCR 测序和标记应用。



    重要,由于细胞焦磷酸盐的水解作用,低浓度焦磷酸盐可促进 DNA 复制,所以过量的无机焦磷酸盐可抑制 PCR 反应。无机焦磷酸盐通常存在于化学合成的 dNTP 中,该污染可以通过 NMR 检测,而不能通过常规 HPLC 方法检测。Bioline 使用的酶合成法产生完全不含无机焦磷酸盐的 dNTP,因此可以通过 HPLC 测定准确的纯度,且可以通过光度测量来确定文字和浓度的同一性。

    重要,通常通过向 dNMP 添加 PPi 来进行化学 dNTP 合成。如果将 PPi 加入到 dNDP 中,可导致核苷四磷酸盐形成,而核苷四磷酸盐可能导致链终止(以凝胶污点和其他 PCR 问题的形式出现)。这在长链 PCR 应用和长片段的逆转录中特别重要。酶合成的 dNTP 不会遇到这样的问题,因为其使用一次只结合一个磷酸基团的高度特异性的酶进行磷酸化。

    我们的 dNTP 混合物的所有浓度均为总和浓度,例如,100 mM dNTP 混合物由各 25 mM 的 dNTP(dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP)组成。

    使用 dUTP 代替 dTTP 或与 dTTP 一起使用时,所得到的 PCR 产物是 Uracil DNA Glycosylase (UDGase) 的合适底物,用户在开始当前扩增之前可使用该酶完全破坏来自先前 PCR 反应的任何污染性 DNA。Bioline 将 dUTP 作为独立产品 (BIO-39035) 以及 dUTP 混合物 (BIO-39041) 的一部分提供。

    我们建议您使用分子生物学或 PCR 级别的水稀释 dNTP。

    PCR 反应中每种 dNTP 的标准浓度是 0.2 mM。如果起始储备溶液是每种 dNTP 100 mM 溶液,则需要将每种核苷酸 0.1 µl 添加到 50µL 标准 PCR 反应中。由于不方便使用,建议制备混合物:如果 100 mM dNTP 储备溶液以等摩尔量混合,则混合物的浓度将为 100 mM(总浓度)或 25 mM(每种核苷酸浓度)。您需要从 100 倍的储备溶液中取 0.5 µL 添加至 50µL 的反应中。Bioline 还提供总量为 40 mM(每种 10 mM)的更加稀释的混合物,其是 50 倍储备溶液和总共 10 mM(每种 2.5 mM)的 10 倍工作储备溶液。Bioline 可提供几种不同的 dNTP Mix 格式,这些溶液随时可用。