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    BIO-21052
    500 Units

    说明

    稳健、高效的校正酶,在高产率 PCR 中提供高保真度,适用于所有常规克隆应用。

    产品特色

    • 高效 – 高效地扩增靶标并从长度最多 5 kb 的扩增子中去除 3' A 突出端
    • 准确 – 具有 3’ - 5’ 校正性核酸外切酶活性,产生的出错率为 3.0 x 10-6,比 Taq DNA 聚合酶具有更高的 PCR 保真度
    • 灵敏 – 从有限量的人类、动物和植物模板 DNA 进行高产量扩增
    • 稳健 – 可靠地扩增即使最具挑战性的靶标,包括基因组 DNA 和富含 GC 的扩增子
    • 灵活 – 适用于从哺乳动物组织样品提取的 DNA 扩增至多 5 kb 的任何靶标
    • 方便 – 先进的缓冲体系最大限度地减少了 PCR 优化的需求,从而减少了获得结果所需的时间,并节省了不必要的重复检测的成本

    产品说明

    ACCUZYME 推荐用于所有常规克隆应用。ACCUZYME 是一种专有的校正酶,即使在要求苛刻的应用中,也能提高保真度和增加 PCR 产量。ACCUZYME 的出错率为 3.0 x 10-6,并产生长度可达 5 kb 的平端扩增子,非常适合用于克隆和定点诱变。

     

    ACCUZYME 配有缓冲体系,为大多数检测提供了理想的条件,因此省去了通常与优化检测性能相关的成本和工作。但在需要进一步优化以提高 PCR 特异性和/或产量的情况下,ACCUZYME 额外提供有一瓶 MgCl2

    应用

    • 需要增加 PCR 产量的常规克隆应用
    • 平端克隆
    • 定点诱变
    Main
    即使使用复杂的模板也能实现高保真度和高产量

    ACCUZYME™ Mix 客户评论

    PCR 选择图

    根据您的仪器和样本要求选择最适合于您研究的试剂

    PCR 酶指南

    下载 PCR 酶指南,本指南提供详细的产品说明和性能数据,帮助您选择最适合您研究的产品

    资源

    分析证明书 (COA)

    技术参数

    组件

    试剂

     500 次反应

    ACCUZYME DNA Polymerase

     200 µL

    10x AccuBuffer

     2 x 1.2 mL

    50 mM MgCl2 Solution

     1.2 mL

    浓度

    2.5 u/µL

    储存和稳定性

    所有组件应在收到后储存在 -20°C 下以保持最佳稳定性。应避免重复冻/融循环。

    在推荐条件下储存并正确处理时,试剂的全部活性将保持至外盒标签上指定的有效期。

    运输条件

    以干冰或蓝冰运输。



    常见问题解答

    与其他校正酶相比,ACCUZYME DNA 聚合酶具有极快的延伸速率,由于校正酶能够返回并纠正核苷酸错配,其自然比非校正聚合酶的速率慢。根据扩增的模板,这些聚合酶的扩增速率可能只有 30 s/kb。为了达到最佳效果,应该在 68°C 下进行延伸。



    ACCUZYME 可处理多达 5 kb 的碎片。

    Bioline 自豪地向您提供高质量的聚合酶以满足您的要求。为了帮助选择最适合您特定应用的酶,请参阅我们的酶选择工具

    我们所有的聚合酶保证自购买之日起 12 个月内保持稳定。在这段时间内,酶应保存在 -20°C 下,以保持最佳的活性。

    请注意:我们不建议在 -80°C 下储存聚合酶,因为活性位点上可能形成冰晶,从而影响或破坏酶的活性。

    PCR 是一项具有挑战性的技术,需要对各种参数进行优化以获得最佳结果。如果遇到问题,通过处理一些问题即可轻松解决。请参阅 PCR 故障排除指南,以获取建议并获得具体问题的帮助。

    观察 推荐的解决方案
    无或低 PCR 产量  酶浓度太低 – 以 0.5 U 的增量增加酶的量。
     引物降解 – 检查引物的质量和期限。
     镁浓度太低 – 以 0.25 mM 的增量从起始浓度 1.75 mM 开始增加浓度。
     引物浓度未优化。调整引物浓度 (0.3-1 µM);确保两种引物具有相同的浓度。
     模板浓度太低 – 增加模板的浓度。
     进行阳性对照以确保酶、dNTP 和缓冲液不被降解和/或污染。
    多个条带  引物退火温度太低。提高退火温度。引物退火温度应该比计算的引物 Tm 至少低 5°C。
     在冰上制备预混液或使用热活化聚合酶。
     对于特异性低的问题。尝试加入 3% 的 DMSO(未提供)以提高特异性。
    污点或伪影  模板浓度太高。制备连续稀释模板。
     循环次数太多。将循环减少 3-5 次,以去除非特异性条带。
     酶浓度太高 - 以 0.5 U 的增量减少酶的量。
     延伸时间太长。以 0.5-1 分钟的增量缩短延伸时间。


    这些术语是指在进行 PCR 时要考虑的参数,是根据您的需要选择正确的酶的重要特征。因此理解其含义至关重要:产量:PCR 反应中产生的 DNA 量。保真度:将正确的 dNTP 并入延伸的 DNA 链中的酶的准确性。持续合成能力:聚合酶与模板相关的时间长度,以及因此可以扩增的片段大小。特异性:衡量反应中产生的不需要的副产物的度量。

    室温下的 PCR 设置过程中,标准聚合酶会有一些活性。使用热启动聚合酶时,该酶在室温下无活性,因此降低了由于这些误引发的寡核苷酸而引起的反应中非特异性产物的风险。此特点使得这类聚合酶非常适用于反应会在室温下长时间放置的高通量应用。

    在自然界中,DNA 聚合酶纠正延伸中的 DNA 链中核苷酸的错误并入的能力对于宿主生物体的存活是至关重要的。这种能力被称为“校正活性”,发生在 3' 到 5' 的方向。该活性还能使聚合酶去除 3' 末端突出的未配对核苷酸(A 突出端),产生平末端。

    在 72°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmol dNTP 转变成酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

    所有的 Bioline 聚合酶都有方便的 2 倍预混液形式可供使用,其中含有进行成功 PCR 所需的所有试剂和添加剂,但模板、引物和水除外。该配方不仅提供了方便和无障碍的 PCR 设置,而且还通过减少所需的移液步骤显著减少了人为错误、不准确性和污染的可能性。

    如果可能的话,我们建议对受影响的样品进行额外的纯化,例如,客户对用 SureClean Plus 纯化含有腐殖酸的样品有非常丰富的经验。或者,降低模板浓度将有助于最大程度减少抑制剂。可增加引物量,但不要超过建议的限值。

    单击此处请求样本。您将在两个工作日内收到一封包含送货详情的确认电子邮件。